液相色譜儀操作

　　二、過濾

　　任何顆粒物進(jìn)入液相色譜系統(tǒng)后都會(huì)在柱子入口端被篩板擋住，zui后的結(jié)果是將柱子堵塞，表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此，要采取各種預(yù)防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設(shè)計(jì)，努力防止或減少顆粒物進(jìn)入HPLC系統(tǒng)中，從而延長(zhǎng)儀器和色譜柱的使用壽命，并提高數(shù)據(jù)的可靠性。在HPLC系統(tǒng)中，顆粒物的主要來源有三個(gè)途徑：流動(dòng)相、被測(cè)樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。

　　1、流動(dòng)相

　　如果流動(dòng)相均由 液相色譜 級(jí)溶劑組成，流動(dòng)相沒有必要過濾。這是因?yàn)橐合嗌V級(jí)的有機(jī)溶劑，例如乙腈、甲醇等，在制造的工藝過程中都已經(jīng)過了0.2μm微孔濾膜過濾。同樣的，無論你是買的HPLC級(jí)的水還是在實(shí)驗(yàn)室使用超純水凈化系統(tǒng)制備的水，zui后一步也是通過0.2μm微孔濾膜。然而，如果有任何一種緩沖液中加入了固體物，例如磷酸鹽，流動(dòng)相過濾將是必要的一個(gè)步驟。雖然緩沖鹽可能是可溶解的、高純的，但它還是可能含有顆粒物質(zhì)，例如在蓋試劑瓶的塑料內(nèi)蓋時(shí)，塑料瓶蓋子與瓶口邊緣擠壓就會(huì)產(chǎn)生塑料顆粒。在這種情況下，添加的一種固體物可能*溶解了，但是少量雜質(zhì)顆粒存在于流動(dòng)相中成為殘?jiān)?/p>

　　流動(dòng)相通過0.45 μm微孔濾膜過濾對(duì)于從流動(dòng)相中除去所有顆粒物是一個(gè)有效方法。0.2μm微孔濾膜也可以用，但是它們就這個(gè)應(yīng)用而言并不比0.45μm微孔濾膜更有效，而且它的過濾速度會(huì)更慢，特別是當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用的試劑和水的質(zhì)量不太好時(shí)。建議實(shí)驗(yàn)室在編寫制定他們流動(dòng)相制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOPs）時(shí)規(guī)定，可以借鑒上同類實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定，即：

　　流動(dòng)相制備僅采用HPLC級(jí)液體時(shí)不需要過濾，反之所有流動(dòng)相組成在使用前必須過濾。

　　在連接儲(chǔ)液瓶和泵的輸液管的末端入口采用下沉式過濾器（常見材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個(gè)過濾器的規(guī)格為≥10μm的微孔物質(zhì)，所以它不能取代流動(dòng)相過濾步驟，但是它能除去系統(tǒng)中的塵土并保證儲(chǔ)液瓶、輸液管使用的可靠性。

　　2、被測(cè)樣品

　　液相系統(tǒng)中的第二個(gè)顆粒物來源是被測(cè)樣品。一些實(shí)驗(yàn)室在將他們的樣品放置在自動(dòng)進(jìn)樣器盤（或手動(dòng)進(jìn)樣）以前，所有樣品都先通過一個(gè)0.45μm針筒式過濾器過濾。這是一個(gè)有效除去被測(cè)樣品中顆粒物的方法。但是這個(gè)過程也有一點(diǎn)需要關(guān)注：你使用了針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測(cè)樣品，總會(huì)有或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等。如果有丟失，過濾后液體中被測(cè)物的含量或濃度與原基本樣液的含量或濃度還相同嗎？這個(gè)問題一般需要通過實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。確認(rèn)這步是要增加工作量和費(fèi)用的。過濾器的使用是一種消耗，每個(gè)過濾器的價(jià)格從幾元到十幾元。但在做食品中殘留物分析時(shí)，由于基質(zhì)大多比較復(fù)雜，所以過濾這步已成為*的一步。在實(shí)際分析工作中，一般檢測(cè)每一組樣品會(huì)帶一個(gè)外標(biāo)、一個(gè)添加回收或是質(zhì)控樣品，所以，只要zui終檢測(cè)時(shí)得到的信噪比能滿足檢出限要求，可將這步視為系統(tǒng)誤差而忽略。

　　3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物

　　zui后，在液相系統(tǒng)中顆粒物的另一個(gè)主要來源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。

　　*種建議認(rèn)為，在一般實(shí)驗(yàn)室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個(gè)月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)基于上述觀點(diǎn)制定定期預(yù)防性維護(hù)計(jì)劃。該觀點(diǎn)認(rèn)為：與輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費(fèi)用相比，更換密封墊的費(fèi)用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網(wǎng)，可在流路中濾掉從泵密封墊磨損下來的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動(dòng)相流至柱頭。若有這種裝置應(yīng)查閱輸液泵操作手冊(cè)，查看推薦的這種過濾器清洗或更換的間隔。

　　另一種建議則認(rèn)為，原裝密封墊的密封效果，更換以后容易引起流動(dòng)相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。

　　兩種說法都有其道理，具體如何操作，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的。

　　自動(dòng)進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)軸的密封隨著使用時(shí)間也會(huì)磨損，但是在我的經(jīng)驗(yàn)中，即便是高負(fù)荷的運(yùn)轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)軸密封墊也可以使用幾年。如果你的自動(dòng)進(jìn)樣器系統(tǒng)有計(jì)數(shù)進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)動(dòng)次數(shù)的功能，你可以設(shè)定一個(gè)警鈴當(dāng)預(yù)設(shè)閥轉(zhuǎn)動(dòng)次數(shù)已達(dá)到時(shí)提醒你。曾有一種說法，進(jìn)樣器zui多轉(zhuǎn)動(dòng)20,000次，這僅僅是進(jìn)樣10000個(gè)；但這似乎不是實(shí)驗(yàn)室涉及的常規(guī)樣品分析使用壽命，它們的實(shí)際使用壽命會(huì)更長(zhǎng)。旋轉(zhuǎn)軸密封磨損后會(huì)滲液，比較明顯的特征是同一樣品多次進(jìn)樣后，峰面積值差別比較大（RSD>5%）。當(dāng)然，輸液泵的密封墊和旋轉(zhuǎn)軸的密封墊磨損將增加更多研磨物在流動(dòng)相中，加速對(duì)這些部件的損傷。此外，如果你日常運(yùn)行的流動(dòng)相有緩沖鹽，如磷酸緩沖鹽，密封墊的磨損會(huì)更快。

　　無論顆粒物源于何物，實(shí)驗(yàn)時(shí)都要將其除去。推薦在HPLC系統(tǒng)中采用一個(gè)0.45或0.5μm的在線多孔過濾器，接在自動(dòng)進(jìn)樣器和柱子之間，即使已使用了保護(hù)柱。這個(gè)在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個(gè)玻璃砂芯濾板，既便宜，更換又方便（幾分鐘就可更換）。若采用在線過濾，HPLC系統(tǒng)檢測(cè)每批樣品開始前記錄下壓力值，當(dāng)壓力上升一定值，例如25%或增加500psi，應(yīng)該更換玻璃砂芯濾板了，更換以后沖洗幾分鐘系統(tǒng)將恢復(fù)到原來的壓力值。